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ELISA的基本原理進(jìn)程分為5個(gè)部分
更新時(shí)間:2018-03-09   點(diǎn)擊次數(shù):888次

ELISA的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng),并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的方式顯現(xiàn)出來(lái)。

首要進(jìn)程分為如下5個(gè)部分:
(1)抗原抗體反應(yīng):抗原或抗體在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。
(2)酶反應(yīng):酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體聯(lián)接構(gòu)成結(jié)合物,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)分,被檢測(cè)靶政策中也結(jié)合了酶分子。
(3)底物反應(yīng):結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促進(jìn)底物發(fā)生顏色反應(yīng),檢測(cè)人員可以裸眼查詢,可以通過(guò)顏色來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,通過(guò)顏色的深淺判別標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量,也可借用酶標(biāo)儀在恰當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。
(4)將抗原抗體反應(yīng)固相化:即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)挑選性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結(jié)構(gòu),堅(jiān)持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
(5)封閉:固相吸附蛋白對(duì)錯(cuò)特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的才干,為了確??乖贵w反應(yīng)的特異性,因此,包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為志向的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清代替。

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