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ELISA檢測樣本類型的多種化
更新時間:2018-03-16   點擊次數(shù):982次

一般咱們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或安排勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步,下面簡略介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。

1、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡略。

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

采血過程中應(yīng)防止溶血,由于紅細胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細菌污染,由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導(dǎo)致檢測的假陽性。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本,標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。防止運用溶血或高血脂的標(biāo)本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3、  細胞培養(yǎng)上清

取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

4、  細胞裂解液

1)  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細胞,加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省掉。

2)  搜集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3)  參加適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液(臨用前參加蛋白酶按捺劑)重懸細胞。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μL PBS重懸。

4)  將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫凍結(jié)樣品,重復(fù)凍融幾回,使細胞充沛裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以到達裂解的意圖。

5)  4℃ 10000×g 離心10min,除掉細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

5、安排勻漿液

1)  將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2)  將安排塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充沛

3)  將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS(臨用前參加蛋白酶按捺劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS體積=1:9的份額勻漿,例如1g的安排樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需求恰當(dāng)調(diào)整,檢測后核算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))

4)  汲取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,取上清即可檢測。

總的來說,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。

為了確保檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。別的,還應(yīng)確保樣本不含NaN3,由于NaN3會按捺HRP的活性,然后導(dǎo)致假陰性的成果。

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