酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELASA）具體操作步驟

ELASA是一種用酶標(biāo)記抗原或抗體，在固相反應(yīng)板上進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的方法。常用于檢測(cè)體液中的微量抗原和抗體，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、容易判斷等優(yōu)點(diǎn)。其檢測(cè)方法、注意事項(xiàng)、結(jié)果分析等詳見(jiàn)檢測(cè)試劑的說(shuō)明書(shū)。本實(shí)驗(yàn)以雙抗體夾心法為例檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原介紹如下：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

要求了解試驗(yàn)原理，試驗(yàn)方法及結(jié)果分析。

實(shí)驗(yàn)材料

1．標(biāo)本：待檢人血清

2．試劑：酶標(biāo)抗體（抗HBs）、HBsAg陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照、洗滌液、顯色劑A、B，終止液

3．器材：已被抗體包被的微量反應(yīng)板（48孔）、微量移液管、酶標(biāo)儀等。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

1．在微量反應(yīng)板每孔加入待檢標(biāo)本50μl，設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照各2孔，每孔加入陽(yáng)性（或陰性）對(duì)照各1滴，并設(shè)空白對(duì)照1孔。

2．每孔加入酶結(jié)合物1滴（空白對(duì)照除外），充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。

3．棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿(mǎn)各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。

4．每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育15分鐘。

5．每孔加終止液1滴，充分混勻。

6．用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與評(píng)價(jià)

樣品OD值≥2.1陰性對(duì)照平均OD值，判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。