一抗的選擇

一般說(shuō)來(lái)，在運(yùn)用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要，關(guān)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而防止二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不該選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子的抗兔 IgG。

假設(shè)選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)辦法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含 IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的 western blotting 檢測(cè)，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培育上清中含有免疫球蛋白，復(fù)原變性樣本中含IgG，在western blot 檢測(cè)中則結(jié)合出現(xiàn) IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。

二抗的選擇

二抗應(yīng)選用與運(yùn)用的一抗相同的物種來(lái)歷，例如：假設(shè)你的一抗是小鼠的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。主張查看二抗說(shuō)明書(shū)保證該抗體適用于你的檢測(cè)運(yùn)用， 二抗一般銜接熒光素 FITC 或發(fā)光團(tuán)。

兩層染色抗體的選擇

兩層染色抗體的選擇用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培育物或組織切片的兩層免疫染色要求一抗來(lái)歷于不同物種而且二抗別離辨認(rèn)其中之一，二抗說(shuō)明書(shū)應(yīng)描繪其與其它物種來(lái)歷的免疫球蛋有否有交叉吸附。

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