根據(jù)實驗室技術案例，以下為大家分享免疫熒光技術的操作方法流程。

免疫熒光技術（immunofluorescence，IF）是根據(jù)抗原-抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原（或抗體）。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原物質(zhì)或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。

免疫熒光技術的操作流程：

（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（綠）和donkey anti-rat-Tex-Red（紅）。

（2）我的做法是兩種一抗同時孵育，然后兩種二抗同時孵育?？贵w濃度、孵育時間要仔細摸索，我感覺一抗4度孵育過夜比較好，背景比較清晰。

（3）我的陽性對照用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標記物對照是PBS+熒光標記物。

（4）封閉血清與二抗來源動物一致，我用的是10%的正常donkey血清。

（5）其余步驟同一般免疫熒光單標操作。

免疫熒光技術的使用方法：

（1）直接熒光法 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少；缺點是敏感性偏低，而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等病原微生物的快速鑒定。

（2）間接熒光法 用一抗與標本中抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗染色。該法優(yōu)點是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可用于多種抗原的檢查，但非特異性反應亦增加。染色程序分為兩步，首先用未知未標記的抗體（待檢標本）加到已知抗原標本上，在濕盒中37℃保溫30min，使抗原抗體充分結(jié)合，然后洗滌，除去未結(jié)合的抗體；然后加上熒光標記的抗球蛋白抗體或抗IgG、IgM抗體。如果*步發(fā)生了抗原-抗體反應，標記的抗球蛋白抗體就會和已結(jié)合抗原的抗體進一步結(jié)合，從而可鑒定未知抗體。 由于免疫熒光技術的特異性、快速性和在細胞和分子水平定位的敏感性與準確性，在動物檢驗檢疫方面得到了廣泛應用。