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關(guān)于原代細(xì)胞具體的提取方法盡在本篇
更新時(shí)間:2022-07-27   點(diǎn)擊次數(shù):635次
  原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長法使細(xì)胞從人體和動(dòng)物的母體器官、組織或液體中分離出來,并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動(dòng)物體內(nèi)生長。
 
  那么原代細(xì)胞具體該如何提取呢?下面讓我們一起來看看吧
 
  1)整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,所有的器材要高壓消毒。
 
  2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。
 
  3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時(shí)在右心耳處剪開一個(gè)小口,緩慢推動(dòng)注射器,隨著心臟的跳動(dòng),將體內(nèi)的血液沖洗出來。
 
  4)取出小鼠的肺部組織,將肺組織切成小米粒樣的大小,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。
 
  5)將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,4度過夜,小鼠處理前,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,消化4個(gè)小時(shí)。
 
  6)消化4小時(shí)后,加入培養(yǎng)基(添加培養(yǎng)基,可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量),繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。
 
  7)24小時(shí)后,取出肺組織,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。
 
  8)原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過程,一般需等到24小時(shí)后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的排列情況。
 
  9)原代細(xì)胞2-3天換液一次,因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長形成單層時(shí),會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞生長接近單層時(shí)就可以傳代了,不要等到長得非常滿。
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